ПЕРЕПРОГРАММИРОВАНИЕ ФИБРОБЛАСТОВ ЛЕГКИХ ПЛОДА ЧЕЛОВЕКА ДО ПЛЮРИПОТЕНТНОСТИ С ПОМОЩЬЮ ЛЕНТИВИРУСНОЙ И СЕНДАЙСКОЙ ВИРУСНОЙ СИСТЕМ

Введение. Индуцированные плюрипотентные стволовые клетки (иПСК) обладают значительным потенциалом для моделирования заболеваний и регенеративной медицины, однако эффективность и безопасность репрограммирования зависят от метода, используемого для доставки факторов Яманаки (OCT4, SOX2, KLF4, c-MYC). Лентивирусные векторы обеспечивают высокую эффективность, однако несут риск инсерционного мутагенеза, тогда как неинтегрирующие системы на основе вируса Сендай обеспечивают транзиторную экспрессию трансгенов. Цель. Целью данного исследования было сравнить две широко используемые стратегии доставки путём репрограммирования первичных фибробластов лёгких человека с использованием как доксициклин-индуцируемых лентивирусных векторов, так и неинтегрирующей системы на основе вируса Сендай. Материалы и методы. Первичные фибробласты лёгких плода человека (20–21 неделя гестации) были выделены методом эксплантной культуры и репрограммированы с использованием либо доксициклин-индуцируемых лентивирусных векторов, кодирующих факторы OKSM, либо набора на основе вируса Сендай (CytoTune 2.0). Формирующиеся колонии иПСК были экспандированы и охарактеризованы методом иммунофлуоресценции на маркеры плюрипотентности (SSEA4, OCT4, TRA-1-60), а также по активности щелочной фосфатазы (ALP). Результаты. Оба метода обеспечили получение колоний иПСК с типичной морфологией (компактная структура, высокое соотношение ядра к цитоплазме). Появление колоний наблюдалось на 15–20-е сутки как в лентивирусной системе репрограммирования, так и в системе на основе вируса Сендай. Иммунофлуоресценция подтвердила экспрессию SSEA4, OCT4 и TRA-1-60 в колониях, полученных обоими подходами, а окрашивание на ALP было положительным. Заключение. Первичные фибробласты лёгких плода человека могут быть репрограммированы в иПСК с использованием как интегрирующих лентивирусных, так и неинтегрирующих систем на основе вируса Сендай. Оба метода позволяют получать стабильные линии иПСК с надлежащими характеристиками. Выбор метода зависит от необходимого баланса между эффективностью и геномной безопасностью.